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高效液相色谱

 

1

.高效液相色谱法的特?/p>

 

特点:检测的分辨率和灵敏度高,分析速度快,重复性好,定量精确度高,应用范围广。适用于分析高

沸点、大分子、强极性、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法?/p>

 

2.

 

高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点?/p>

 

(1)

进样方式的不同:高效液相色谱只要将样品制成溶液,而气相色谱需加热气化或裂解;

 

(2)

流动相不同,在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力;

 

(3)

由于液体的粘度较气体大两个数量级,使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中?/p>

?/p>

4~5

个数量级?/p>

 

(4)

由于流动相的化学成分可进行广泛选择,并可配置成二元或多元体系,满足梯度洗脱的需要,因?/p>

提高了高效液相色谱的分辨率(柱效能)?/p>

 

(5)

高效液相色谱采用

5~10Lm

细颗粒固定相?/p>

使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小,

流动阻力增大?/p>

?/p>

须借助高压泵输送流动相?/p>

 

(6)

高效液相色谱是在液相中进行,对被测组分的检测,通常采用灵敏的湿法光度检测器,例如,紫外

光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等?/p>

 

3. 

高效液相色谱的定性和定量分析的方?/p>

 

定?/p>

:(

1

)利用纯物质定性的方法

 

利用保留值定性:通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰,来确定试样中是否含有该物

质及在色谱图中位置?/p>

不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比?/p>

利用加入法定性:

将纯物质加入?/p>

试样中,观察各组分色谱峰的相对变化?/p>

 

?/p>

2

)利用文献保留值定?/p>

 

相对保留?/p>

r21

:相对保留?/p>

r

21

仅与柱温和固定液性质有关。在色谱手册中都列有各种物质在不

同固定液上的保留数据,可以用来进行定性鉴定?/p>

 

定量

:有归一法、内标法、外标法

 

在定量分析中,采用测量峰面积的归一化法、内标法或外标法等,但高效液相色谱在分离复杂组分

式样时,有些组分常不能出峰,因此归一化法定量受到限制,而内标法定量则被广泛使用?/p>

 

4

.高效液相色谱实验时,选择流动相时应注意的几个问题

 

?/p>

1

)尽量使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加?/p>

 

?/p>

2

)避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失;酸性溶剂破坏氧

化铝固定相等?/p>

 

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3

)试样在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积?/p>

 

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高效液相色谱

 

1

.高效液相色谱法的特?/p>

 

特点:检测的分辨率和灵敏度高,分析速度快,重复性好,定量精确度高,应用范围广。适用于分析高

沸点、大分子、强极性、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法?/p>

 

2.

 

高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点?/p>

 

(1)

进样方式的不同:高效液相色谱只要将样品制成溶液,而气相色谱需加热气化或裂解;

 

(2)

流动相不同,在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力;

 

(3)

由于液体的粘度较气体大两个数量级,使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中?/p>

?/p>

4~5

个数量级?/p>

 

(4)

由于流动相的化学成分可进行广泛选择,并可配置成二元或多元体系,满足梯度洗脱的需要,因?/p>

提高了高效液相色谱的分辨率(柱效能)?/p>

 

(5)

高效液相色谱采用

5~10Lm

细颗粒固定相?/p>

使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小,

流动阻力增大?/p>

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须借助高压泵输送流动相?/p>

 

(6)

高效液相色谱是在液相中进行,对被测组分的检测,通常采用灵敏的湿法光度检测器,例如,紫外

光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等?/p>

 

3. 

高效液相色谱的定性和定量分析的方?/p>

 

定?/p>

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1

)利用纯物质定性的方法

 

利用保留值定性:通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰,来确定试样中是否含有该物

质及在色谱图中位置?/p>

不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比?/p>

利用加入法定性:

将纯物质加入?/p>

试样中,观察各组分色谱峰的相对变化?/p>

 

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2

)利用文献保留值定?/p>

 

相对保留?/p>

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:相对保留?/p>

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仅与柱温和固定液性质有关。在色谱手册中都列有各种物质在不

同固定液上的保留数据,可以用来进行定性鉴定?/p>

 

定量

:有归一法、内标法、外标法

 

在定量分析中,采用测量峰面积的归一化法、内标法或外标法等,但高效液相色谱在分离复杂组分

式样时,有些组分常不能出峰,因此归一化法定量受到限制,而内标法定量则被广泛使用?/p>

 

4

.高效液相色谱实验时,选择流动相时应注意的几个问题

 

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1

)尽量使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加?/p>

 

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2

)避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失;酸性溶剂破坏氧

化铝固定相等?/p>

 

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)试样在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积?/p>

 

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高效液相色谱

 

1

.高效液相色谱法的特?/p>

 

特点:检测的分辨率和灵敏度高,分析速度快,重复性好,定量精确度高,应用范围广。适用于分析高

沸点、大分子、强极性、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法?/p>

 

2.

 

高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点?/p>

 

(1)

进样方式的不同:高效液相色谱只要将样品制成溶液,而气相色谱需加热气化或裂解;

 

(2)

流动相不同,在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力;

 

(3)

由于液体的粘度较气体大两个数量级,使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中?/p>

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4~5

个数量级?/p>

 

(4)

由于流动相的化学成分可进行广泛选择,并可配置成二元或多元体系,满足梯度洗脱的需要,因?/p>

提高了高效液相色谱的分辨率(柱效能)?/p>

 

(5)

高效液相色谱采用

5~10Lm

细颗粒固定相?/p>

使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小,

流动阻力增大?/p>

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须借助高压泵输送流动相?/p>

 

(6)

高效液相色谱是在液相中进行,对被测组分的检测,通常采用灵敏的湿法光度检测器,例如,紫外

光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等?/p>

 

3. 

高效液相色谱的定性和定量分析的方?/p>

 

定?/p>

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1

)利用纯物质定性的方法

 

利用保留值定性:通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰,来确定试样中是否含有该物

质及在色谱图中位置?/p>

不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比?/p>

利用加入法定性:

将纯物质加入?/p>

试样中,观察各组分色谱峰的相对变化?/p>

 

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2

)利用文献保留值定?/p>

 

相对保留?/p>

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仅与柱温和固定液性质有关。在色谱手册中都列有各种物质在不

同固定液上的保留数据,可以用来进行定性鉴定?/p>

 

定量

:有归一法、内标法、外标法

 

在定量分析中,采用测量峰面积的归一化法、内标法或外标法等,但高效液相色谱在分离复杂组分

式样时,有些组分常不能出峰,因此归一化法定量受到限制,而内标法定量则被广泛使用?/p>

 

4

.高效液相色谱实验时,选择流动相时应注意的几个问题

 

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1

)尽量使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加?/p>

 

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2

)避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失;酸性溶剂破坏氧

化铝固定相等?/p>

 

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)试样在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积?/p>

 

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仪器分析实验的课后习题答案及讨论 - 百度文库
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高效液相色谱

 

1

.高效液相色谱法的特?/p>

 

特点:检测的分辨率和灵敏度高,分析速度快,重复性好,定量精确度高,应用范围广。适用于分析高

沸点、大分子、强极性、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法?/p>

 

2.

 

高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点?/p>

 

(1)

进样方式的不同:高效液相色谱只要将样品制成溶液,而气相色谱需加热气化或裂解;

 

(2)

流动相不同,在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力;

 

(3)

由于液体的粘度较气体大两个数量级,使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中?/p>

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(4)

由于流动相的化学成分可进行广泛选择,并可配置成二元或多元体系,满足梯度洗脱的需要,因?/p>

提高了高效液相色谱的分辨率(柱效能)?/p>

 

(5)

高效液相色谱采用

5~10Lm

细颗粒固定相?/p>

使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小,

流动阻力增大?/p>

?/p>

须借助高压泵输送流动相?/p>

 

(6)

高效液相色谱是在液相中进行,对被测组分的检测,通常采用灵敏的湿法光度检测器,例如,紫外

光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等?/p>

 

3. 

高效液相色谱的定性和定量分析的方?/p>

 

定?/p>

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1

)利用纯物质定性的方法

 

利用保留值定性:通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰,来确定试样中是否含有该物

质及在色谱图中位置?/p>

不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比?/p>

利用加入法定性:

将纯物质加入?/p>

试样中,观察各组分色谱峰的相对变化?/p>

 

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2

)利用文献保留值定?/p>

 

相对保留?/p>

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:相对保留?/p>

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21

仅与柱温和固定液性质有关。在色谱手册中都列有各种物质在不

同固定液上的保留数据,可以用来进行定性鉴定?/p>

 

定量

:有归一法、内标法、外标法

 

在定量分析中,采用测量峰面积的归一化法、内标法或外标法等,但高效液相色谱在分离复杂组分

式样时,有些组分常不能出峰,因此归一化法定量受到限制,而内标法定量则被广泛使用?/p>

 

4

.高效液相色谱实验时,选择流动相时应注意的几个问题

 

?/p>

1

)尽量使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加?/p>

 

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2

)避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失;酸性溶剂破坏氧

化铝固定相等?/p>

 

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3

)试样在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积?/p>

 



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