新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

1.

研磨制样:先向研钵中加入少量液氮,等液氮挥发使研钵预冷。再向研钵内?/p>

入适量液氮?/p>

?/p>

-70

度冰箱取出组织,

用镊子从冻存管中夹取一小块放入研钵中?/p>

迅速研磨组织块,成粉末时加?/p>

1ml

?/p>

trizol

,继续研磨,可看到粉末成浆,?/p>

浓变稀,直至组织样全部溶解,用移液枪吸到无?/p>

EP

管?/p>

 

2. Trizol

法提?/p>

RNA 

 

1) 

室温静置

3-10min

,使蛋白质变性;

 

2) 

加入

1/4~1/5

体积的氯仿,颠倒震?/p>

1min

,室温静?/p>

3-5min

,静置分层,?/p>

?/p>

4

℃离心,

12000rpm

?/p>

5min

?/p>

(核蛋白复合体彻底裂解)

 

3) 

吸取上清至无酶的

EP

管中,加入等体积的酚:氯仿,颠倒震?/p>

1min

,室?/p>

静置

3-5min

,静置分层,然后

4

℃离心,

12000rpm

?/p>

5min

,取上清。若是细?/p>

RNA

提取可只加等体积氯仿抽提一次,但对于组织一般都要重复该步骤,至?/p>

有蛋白层为止?/p>

一般抽提两次?/p>

(离心后会分为三次:

上层?/p>

水相?/p>

中间层:

DNA

?/p>

下层?/p>

蛋白?/p>

为了降低水相和有机相分界?/p>

DNA

污染?/p>

不要吸取水相的最下层?/p>

 

4) 

加入等体积的预冷的异丙醇,颠倒混匀,冰上静?/p>

30min

,然?/p>

4

℃离?/p>

12000rpm

?/p>

30min

,弃上清?/p>

(此步骤主要是充分沉淀

RNA

,然后收集。故步骤

中的冰置

30min,

也可以是?/p>

-20°

放置半小时以上,甚至过夜?/p>

 

5) 

加入

100ul 70%

乙醇?/p>

将沉淀吹起来,

注意不要吹散?/p>

然后

4

?/p>

12000rpm

?/p>

5min

?/p>

 

6) 

弃上清,空气中挥发乙醇,至壁上无液滴?/p>

 

7) 

加入适量

DEPC

水,

(一般为

20ul

)溶解?/p>

 

8) 

分光光度计检?/p>

RNA

浓度?/p>

OD

值,?/p>

Total RNA

稀释至

1ug/ul

,备用?/p>

 

 

Ͼλ
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

1.

研磨制样:先向研钵中加入少量液氮,等液氮挥发使研钵预冷。再向研钵内?/p>

入适量液氮?/p>

?/p>

-70

度冰箱取出组织,

用镊子从冻存管中夹取一小块放入研钵中?/p>

迅速研磨组织块,成粉末时加?/p>

1ml

?/p>

trizol

,继续研磨,可看到粉末成浆,?/p>

浓变稀,直至组织样全部溶解,用移液枪吸到无?/p>

EP

管?/p>

 

2. Trizol

法提?/p>

RNA 

 

1) 

室温静置

3-10min

,使蛋白质变性;

 

2) 

加入

1/4~1/5

体积的氯仿,颠倒震?/p>

1min

,室温静?/p>

3-5min

,静置分层,?/p>

?/p>

4

℃离心,

12000rpm

?/p>

5min

?/p>

(核蛋白复合体彻底裂解)

 

3) 

吸取上清至无酶的

EP

管中,加入等体积的酚:氯仿,颠倒震?/p>

1min

,室?/p>

静置

3-5min

,静置分层,然后

4

℃离心,

12000rpm

?/p>

5min

,取上清。若是细?/p>

RNA

提取可只加等体积氯仿抽提一次,但对于组织一般都要重复该步骤,至?/p>

有蛋白层为止?/p>

一般抽提两次?/p>

(离心后会分为三次:

上层?/p>

水相?/p>

中间层:

DNA

?/p>

下层?/p>

蛋白?/p>

为了降低水相和有机相分界?/p>

DNA

污染?/p>

不要吸取水相的最下层?/p>

 

4) 

加入等体积的预冷的异丙醇,颠倒混匀,冰上静?/p>

30min

,然?/p>

4

℃离?/p>

12000rpm

?/p>

30min

,弃上清?/p>

(此步骤主要是充分沉淀

RNA

,然后收集。故步骤

中的冰置

30min,

也可以是?/p>

-20°

放置半小时以上,甚至过夜?/p>

 

5) 

加入

100ul 70%

乙醇?/p>

将沉淀吹起来,

注意不要吹散?/p>

然后

4

?/p>

12000rpm

?/p>

5min

?/p>

 

6) 

弃上清,空气中挥发乙醇,至壁上无液滴?/p>

 

7) 

加入适量

DEPC

水,

(一般为

20ul

)溶解?/p>

 

8) 

分光光度计检?/p>

RNA

浓度?/p>

OD

值,?/p>

Total RNA

稀释至

1ug/ul

,备用?/p>

 

 

">
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

1.

研磨制样:先向研钵中加入少量液氮,等液氮挥发使研钵预冷。再向研钵内?/p>

入适量液氮?/p>

?/p>

-70

度冰箱取出组织,

用镊子从冻存管中夹取一小块放入研钵中?/p>

迅速研磨组织块,成粉末时加?/p>

1ml

?/p>

trizol

,继续研磨,可看到粉末成浆,?/p>

浓变稀,直至组织样全部溶解,用移液枪吸到无?/p>

EP

管?/p>

 

2. Trizol

法提?/p>

RNA 

 

1) 

室温静置

3-10min

,使蛋白质变性;

 

2) 

加入

1/4~1/5

体积的氯仿,颠倒震?/p>

1min

,室温静?/p>

3-5min

,静置分层,?/p>

?/p>

4

℃离心,

12000rpm

?/p>

5min

?/p>

(核蛋白复合体彻底裂解)

 

3) 

吸取上清至无酶的

EP

管中,加入等体积的酚:氯仿,颠倒震?/p>

1min

,室?/p>

静置

3-5min

,静置分层,然后

4

℃离心,

12000rpm

?/p>

5min

,取上清。若是细?/p>

RNA

提取可只加等体积氯仿抽提一次,但对于组织一般都要重复该步骤,至?/p>

有蛋白层为止?/p>

一般抽提两次?/p>

(离心后会分为三次:

上层?/p>

水相?/p>

中间层:

DNA

?/p>

下层?/p>

蛋白?/p>

为了降低水相和有机相分界?/p>

DNA

污染?/p>

不要吸取水相的最下层?/p>

 

4) 

加入等体积的预冷的异丙醇,颠倒混匀,冰上静?/p>

30min

,然?/p>

4

℃离?/p>

12000rpm

?/p>

30min

,弃上清?/p>

(此步骤主要是充分沉淀

RNA

,然后收集。故步骤

中的冰置

30min,

也可以是?/p>

-20°

放置半小时以上,甚至过夜?/p>

 

5) 

加入

100ul 70%

乙醇?/p>

将沉淀吹起来,

注意不要吹散?/p>

然后

4

?/p>

12000rpm

?/p>

5min

?/p>

 

6) 

弃上清,空气中挥发乙醇,至壁上无液滴?/p>

 

7) 

加入适量

DEPC

水,

(一般为

20ul

)溶解?/p>

 

8) 

分光光度计检?/p>

RNA

浓度?/p>

OD

值,?/p>

Total RNA

稀释至

1ug/ul

,备用?/p>

 

 

Ͼλ">
Ͼλ
Ŀ

Trizol法提取组织总RNA步骤 - 百度文库
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

1.

研磨制样:先向研钵中加入少量液氮,等液氮挥发使研钵预冷。再向研钵内?/p>

入适量液氮?/p>

?/p>

-70

度冰箱取出组织,

用镊子从冻存管中夹取一小块放入研钵中?/p>

迅速研磨组织块,成粉末时加?/p>

1ml

?/p>

trizol

,继续研磨,可看到粉末成浆,?/p>

浓变稀,直至组织样全部溶解,用移液枪吸到无?/p>

EP

管?/p>

 

2. Trizol

法提?/p>

RNA 

 

1) 

室温静置

3-10min

,使蛋白质变性;

 

2) 

加入

1/4~1/5

体积的氯仿,颠倒震?/p>

1min

,室温静?/p>

3-5min

,静置分层,?/p>

?/p>

4

℃离心,

12000rpm

?/p>

5min

?/p>

(核蛋白复合体彻底裂解)

 

3) 

吸取上清至无酶的

EP

管中,加入等体积的酚:氯仿,颠倒震?/p>

1min

,室?/p>

静置

3-5min

,静置分层,然后

4

℃离心,

12000rpm

?/p>

5min

,取上清。若是细?/p>

RNA

提取可只加等体积氯仿抽提一次,但对于组织一般都要重复该步骤,至?/p>

有蛋白层为止?/p>

一般抽提两次?/p>

(离心后会分为三次:

上层?/p>

水相?/p>

中间层:

DNA

?/p>

下层?/p>

蛋白?/p>

为了降低水相和有机相分界?/p>

DNA

污染?/p>

不要吸取水相的最下层?/p>

 

4) 

加入等体积的预冷的异丙醇,颠倒混匀,冰上静?/p>

30min

,然?/p>

4

℃离?/p>

12000rpm

?/p>

30min

,弃上清?/p>

(此步骤主要是充分沉淀

RNA

,然后收集。故步骤

中的冰置

30min,

也可以是?/p>

-20°

放置半小时以上,甚至过夜?/p>

 

5) 

加入

100ul 70%

乙醇?/p>

将沉淀吹起来,

注意不要吹散?/p>

然后

4

?/p>

12000rpm

?/p>

5min

?/p>

 

6) 

弃上清,空气中挥发乙醇,至壁上无液滴?/p>

 

7) 

加入适量

DEPC

水,

(一般为

20ul

)溶解?/p>

 

8) 

分光光度计检?/p>

RNA

浓度?/p>

OD

值,?/p>

Total RNA

稀释至

1ug/ul

,备用?/p>

 

 



ļ׺.doc޸Ϊ.docĶ

  • ͬѧ2016ȶ⾭ó״ѧר˶ĵ
  • ѧ(DOC)
  • ۾ѧ߰κϰ
  • г2018пѧϰͼרϰϰ()
  • ԭĩϰϿ
  • ѧκ
  • ¹㶫ǰ꼶²ֽ̰
  • PART 4ļۺѵ20
  • 2018ͨߵѧУȫͳһѧ (ȫ2,)
  • ũҩӦüϰ

վ

԰ Ͼλ
ϵͷ779662525#qq.com(#滻Ϊ@) ICP20003344-4