一、过氧化物酶?/p>
POD
)活性的测定
POD
测定参照李合生等?/p>
2003
)的愈创木酚法方法进行测定,略加改动?/p>
测定:称取样?/p>
0.5g
,加?/p>
5mL
1
?/p>
15
mol
?/p>
L PH=7.0
的磷酸缓冲溶液,冰浴
研磨成匀浆,
4
℃条件下
12000r/min
离心
15min
,上清液为粗酶液。然后在试管?/p>
?/p>
pH 7.0
的磷酸缓冲液
2 ml
?/p>
愈创木酚
?/p>
0.2%
?/p>
0.5ml
?/p>
浓度?/p>
0.15%
?/p>
H
2
O
2
0.5ml
?/p>
?/p>
0.3ml
的酶提取液加入到试管中,
空白以缓冲液代替?/p>
?/p>
470nm
下测定其吸光度,
加入酶液时开始计时,每隔
30s
读数一次,连续记录
5
分钟。以每分钟每克鲜重增
?/p>
0.1
的酶量作为一个酶活性单位?/p>
?/p>
470 ×
V
T
POD
活?/p>
=
0.01×
t×
Vs×
W
式中?/p>
?/p>
470----
反应时间内吸光度值的变化?/p>
V
T
----
提取酶液的总体积(
ml
?/p>
t----
反应的时间(
min
?/p>
Vs ----
测定时取用酶液体积(
ml
?/p>
W----
样品鲜重?/p>
g
?/p>
二、多酚氧化酶?/p>
PPO
)活性的测定
多酚氧化酶活性测定参照朱广廉?/p>
(1990)
的方法,略加改动?/p>
酶液制备:称取样?/p>
0.5g
,加?/p>
5mL
0.1mol
?/p>
L PH=6.0
的磷酸缓冲溶?/p>
?/p>
冰浴研磨成浆?/p>
4
℃条件下
12000r/min
离心
15min
后上清液即为粗酶液?/p>
PPO
活性测定:
反应试管中分别加?/p>
0.1 mL
酶液
+3.9 mL
磷酸缓冲?/p>
+ 1 mL
1m mol
?/p>
L
的邻苯二酚。混匀后于
30
℃保?/p>
10 min
,迅速加?/p>
2 mL
质量分数
?/p>
20
%的三氯乙酸终止反应,立即于
525nm
下测定其吸光度值,计算酶活?/p>
PPO
活?/p>
=
O
D
×
V
T
0.01×
t×
0.5g×
V
s
=
O
D
×
V
T
0.005
OD
—?/p>
反应时间内吸光值的变化?/p>
V
T
----
提取酶液的总体积(
ml
?/p>
Vs ----
测定时取用酶液体积(
ml
?/p>
T
——?/p>
反应时间
(min)
?/p>