精品文档
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实践?/p>
病毒血凝和血凝抑制试?/p>
--
(以新城疫为例)
实践目的?/p>
1
.掌握血凝(
HA
)和血凝抑?/p>
(HI)
试验的原?/p>
2
.掌握鸡新城疫病毒血凝和血凝抑制试验的操作方法
实践原理?/p>
某些病毒
(
如鸡新城疫病毒,
禽流感病毒等
)
能够与人或动物的红细胞发生凝集,
此即?/p>
红细胞凝集现象?/p>
这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异性抗?/p>
(免疫血清)
所抑制?/p>
即为红细胞凝集抑制试验?/p>
实践内容?/p>
1
?/p>
红细胞凝集试?/p>
(HA
试验
)
主要是测定病毒的红细胞凝集价?/p>
以确定红细胞凝集抑制?/p>
验所用病毒稀释倍数
(
抗原单位
)
。有试管法和微量法两种,现以常用的微量法进行说明?/p>
鸡新城疫病毒?/p>
HA
试验现采用微量法,在
V
形微量反应板上进行?/p>
(1)
首先用微量移液器向每个孔加入稀释液即灭菌生理盐水一?25µl)?/p>
(2)
用微量移液器取病毒抗原液
25µl
加入?/p>
1
孔内?/p>
吸头浸于液体中缓慢吸吹几次使?/p>
毒与稀释液混合均匀,再吸取
25µl
液体小心地移至第
2
孔,如此连续稀释至?/p>
11
孔,?/p>
11
孔吸?/p>
25µl
液体弃掉;病毒稀释倍数依为
1:2
?/p>
1:2048
,第
12
孔为红细胞对照?/p>
(3)
再以微量移液器每孔加
1.0
%红细胞悬浮?/p>
1
?25µl)?/p>
(4)
在振荡器上振荡混匀?/p>
l
?/p>
2
分钟,再?/p>
37
℃作?/p>
15
分钟后观察结果?/p>
(5)
每次测定样品都应同时做红细胞对照?/p>
?/p>
1
鸡新城疫血凝效?/p>
(HA)
的测定术?/p>
(
微量?/p>
)
孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
?/p>
?/p>
稀
?/p>
?/p>
?/p>
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
1:1024
1:2048
对照
生理盐水
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
病毒?/p>
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
弃去
1
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
25µl
感作
置振荡器上混匀
1
?/p>
2
分钟,放
37
℃静?/p>
15
分钟
?/p>
?/p>
例示
#
#
#
#
#
#
#
++
-
-
-
-
#
表示
100
%完全凝?/p>
++
表示
50
%凝?/p>
-
表示不凝?/p>