第二?/p>
细胞生物学实验技?/p>
一、名词解?/p>
1
.显微分辨率?/p>
microscopic
resolution
?/p>
---
在一定条件下利用显微镜所能看到的?/p>
细程度?/p>
2
.放射自显影技术(
autoradiography
?/p>
---
用于整个细胞时,可以确定放射性标记物
在细胞内的定位。用于凝胶或琼脂平板时,能鉴定出放射性的条带或菌落?/p>
3
.双向凝胶电泳(
two-dimensional
electrophoresis
?/p>
---
根据分子质量及等电点的不
同将复杂的蛋白质混合物分开?/p>
这种高分辨率的技术能够分离同一混合物中的上?/p>
种蛋白质?/p>
4
.倒置显微镜(
inverted
microscope
?/p>
---
一种主要用于观察培养瓶或培养皿中的?/p>
细胞生长及分裂状态的特殊显微镜。与普通光镜相比,其光源、聚光镜和物镜的?/p>
置是倒置的,即光源在上,物镜在载物台的下方。另外,其聚光镜和物镜有较长?/p>
工作距离,以方便放置有一定厚度的培养瓶?/p>
二、简答题
1
.电子显微镜为何不能观察活标本?
因为电镜样品的观察室要求高度的真空条件?/p>
2
.简述冷冻蚀刻术的原理和方法?/p>
冷冻蚀刻(
freeze
?/p>
etching
)技术是在冷冻断裂技术的基础上发展起来的?/p>
复杂的复型技术?/p>
如果将冷冻断裂的样品的温度稍微升高,
让样品中的冰在真?/p>
中升华,
而在表面上浮雕出细胞膜的超微结构?/p>
当大量的冰升华之后,
对浮雕表
面进行铂一碳复型,
并在腐蚀性溶液中除去生物材料?/p>
复型经重蒸水多次清洗后,
捞在载网上作电镜观察?/p>
3
.比较投射电子显微镜和扫描电子显微镜?/p>
答:都是用于放大与分辨微小结构,都是通过标本电子束的影响来探测标?/p>
结构?/p>
TEM
:电子束穿过标本,聚焦成像于屏幕或者显像屏上。用于研究超薄切?/p>
标本,有极高的分辨率,可给出细微的胞内结构?/p>
SEM
:电子束在标本表面进行扫描,反射的电子聚焦成像于显像屏上。可?/p>
反映未切片标本的的表面特征?/p>
4
.扫描隧道显微镜的工作原理及其优越性是什么?
扫描隧道显微镜(
scanning
tunneling
microscope
?/p>
STM
?/p>
?/p>
Binnig
?/p>
1981
?/p>
发明?/p>
是根据量子力学原理中的隧道效应而设计制造的?/p>
当原子尺度的针尖在不?/p>
一个纳米的高度上扫描样品时?/p>
此处电子云重叠,
外加一电压
?/p>
2mV~2V
?/p>
?/p>
针尖?/p>
样品之间产生隧道效应而有电子逸出?/p>
形成隧道电流?/p>
电流强度和针尖与样品间的
距离有一指数关系?/p>
当探针沿物质表面按给定高度扫描时?/p>
因样品表面原子凹凸不
平,使探针与物质表面间的距离不断发生改变,从而引起电流不断发生改变。将?/p>
流的这种改变图像化即可显示出原子水平的凹凸形态?/p>
扫描隧道显微镜的分辨率很
高,横向?/p>
0.1~0.2nm
,纵向可?/p>
0.001nm
。它的优点是三态(固态、液态和气态)
物质均可进行观察,而普通电镜只能观察制作好的固体标本?/p>
优越性:
1)
高分辨率
原子级分辨率,横向为
1
埃,纵向?/p>
0.1
埃?/p>
2)
可直接绘