实验一
血清蛋白醋酸纤维薄膜电?/p>
一、目?/p>
学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一般原理?/p>
二、原?/p>
带电颗粒在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳:采用醋酸纤维
薄膜为支持物的电泳方法,叫做醋酸纤维薄膜电泳法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素?/p>
成,它具有均一的泡沫样的结构,厚度?/p>
12
μ
m
,有强渗透性,对分子移动无阻力,作?/p>
区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少,应用范围广,分离清晰,?/p>
有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋由、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白和同功酶的分
离及用在免疫电泳中?/p>
三、器?/p>
1
.醋酸纤维薄膜(
2
×
8cm
?/p>
2
.常压电泳仪
3
.点样器
4
.培养皿
5
.粗滤纸
6
.玻璃板
7
.竹?/p>
8
.白磁反应板
9
.新鲜血?/p>
四、试?/p>
1
.巴比妥缓冲液(
pH8.6
,离子强?/p>
0.07
?/p>
巴比?/p>
2.67g
,巴比妥?/p>
15.45g
,加水至
1000m1
?/p>
2
.染色液
含氨基黑
10B 0.25g
,甲?/p>
50ml
,冰醋酸
10ml
,水
40m1
?/p>
可反复使用?/p>
3
.漂洗液
含甲醇或乙醇
45 m1
,冰醋酸
5ml
,水
50m1
?/p>
4
.透明?/p>
含无水乙?/p>
7
份,冰醋?/p>
3
份?/p>
五、操?/p>
1
.浸泡:
用镊子取醋酸纤维薄膜一张(识别光泽面与元光溶面,并在一角做上记号),放在缓
冲液中浸?/p>
20min
?/p>
2
.点样:
把膜条从缓冲液中取出,夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体,然后将无光泽重面朝上平?/p>
在玻璃扳上。将点样器放置于白磁反应板中的血清中沾一下,再在膜一?/p>
1.5cm
处轻轻地
水平落下并随即提起,这样即在膜条上点上细条状的血清样品。掌握点样技术,是获得具