西南大学
西南大学网络与继续教育学院课程考试试题
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类别:网æ•?/p>
专业:公共课
2017
å¹?/p>
6
�/p>
课程名称【编号】:生活中的
DNA
科学ã€?/p>
1194
�/p>
A
�/p>
大作ä¸?/p>
满分ï¼?/p>
100
�/p>
请从下面的题目中任é€?/p>
4
题作答,每题
25
分ã€?/p>
一ã€?/p>
什么是
cDNA
文库?如何构建?
答:
cDNA
文库
:
某种生物基因组转录的全部
mRNA
经反转录产生çš?/p>
cDNA
�/p>
段分别与克隆载体重组,并将其引入到相应的宿主细胞中(一般为
E.coli.
)繁殖和æ‰?/p>
增,理论上此群体就包含有该物种的全部
mRNA
信息,称该生物基因组çš?/p>
cDNA
æ–?/p>
�/p>
cDNA
文库的构建:是指å°?/p>
cDNA
与克隆载ä½?/p>
DNA
体外重组,然后去转化
克隆载体
DNA
的宿主细胞,
从而得到一群含重组
DNA
的细菌或噬菌体克隆的过程ã€?/p>
这些序列来自并代表一定组织或细胞类型特定发育或分化阶段的整个
mRNA
群体ã€?/p>
其过程可概括为:ï¼?/p>
1
)通过反转录酶将各ç§?/p>
mRNA
转变åœ?/p>
cDNA
;(
2
ï¼?/p>
cDNA
�/p>
合适的载体重组并导入到宿主中ã€?/p>
1
�/p>
mRNA
纯化,使å¾?/p>
mRNA
ä»?/p>
RNA
分子的混合物中分离出来,方法有三种:å¯?/p>
脱氧胸苷酸亲和层析,
溶液杂交ï¼?/p>
生物素标记寡脱氧胸苷酸和链霉亲和素包被磁性球
珠ã€?/p>
2
�/p>
cDNA
的合成与克隆
,(
1
ï¼?/p>
cDNA
第一条链的合成,所有合æˆ?/p>
cDNA
第一条链
的方法都要用依赖äº?/p>
RNA
çš?/p>
DNA
聚合酶(反转录酶)来催化反应,有两个关键çš?
因素,一个是
mRNA
模板,另一个反转录酶ã€?/p>
ï¼?/p>
2
ï¼?/p>
cDNA
第二条链的合成,合成
cDNA
第二条链的传统方法是“自身引导法â€?/p>
ï¼?/p>
3
ï¼?/p>
cDNA
的克隆,
dscDNA
(双é“?/p>
cDNA
)合成后,将æ?/p>
DNA
与载体(质粒或噬
菌体ï¼?/p>
组成重组分子ï¼?/p>
然后转化到受体菌中进行扩增ã€?/p>
CDNA
文库可用质粒载体或噬
菌体载体构建。质粒文库具有易于操作的优点,但质粒文库适于筛é€?/p>
10000
�/p>
50000
个重组子。噬菌体文库更适合于筛选较大数量(
>100000
)的重组子ã€?/p>
.
ï¼?/p>
4
)重组子的筛选与鉴定,基因克隆的最后一道程序是从转化细菌菌落中筛选含æœ?/p>
阳性重组子的菌落并鉴定重组子的正确性,
通过细菌培养以及重组子的扩增ï¼?/p>
从而获
得所需基因片段的大量拷贝,进一步研究该基因的结构,功能或表达该基因的产物ã€?/p>
构建
cDNA
文库的新方法ï¼?/p>
近年来已发展了一äº?/p>
cDNA
文库构建的新方法和新技术,
主要有:减数
cDNA
文库、标准化
cDNA
文库,这
2
种特殊的
cDNA
文库构建方法
用不同的策略和方法富集特定的
cDNA
给克隆新基因提供了有力的工具
二ã€?/p>
简述中心法则的主要内容ã€?/p>
答:
中心法则是描述遗传信息传递方向和规律的学说,
是指遗传信息ä»?/p>
DNA
ä¼?/p>
递给
RNA
ï¼?/p>
再从
RNA
传递给蛋白质,
即完成遗传信息的转录和翻译的过程ã€?/p>
ä¹?/p>
可以ä»?/p>
DNA
传递给
DNA
,即完成
DNA
的复制过程。这是所有有细胞结构的生
物所遵循的法则。在某些病毒中的
RNA
自我复制(如烟草花叶病毒等)和在æŸ?/p>
些病毒中能以
RNA
为模板逆转录成
DNA
的过程(某些致癌病毒)是对中心法
则的补充
内容
①从
DNA
流向
DNA
ï¼?/p>
DNA
自我复制);
②从
DNA
流向
RNA
,进而流向蛋白质(转录和翻译);