内容发布更新时间 : 2024/5/29 17:17:17星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.
2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v). 3. Stir at 4℃for 2 hours.
4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.
5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).
沉淀法-病毒提纯方法
主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒，有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。
1.中性盐沉淀法：病毒一般在45%以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵，可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。
2.聚乙二醇沉淀法：聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物，具有各种不同的分子量，用于病毒沉淀的主要是分子量为2 000～6000的PEG。将PEG配成50%左右的溶液，或直接将固体PEG加于病毒悬液中，使其达到所需浓度，通常在4℃搅拌过夜，然后离心使病毒沉淀。Tanncock(1985年) 成功地用PEG浓缩了禽脑脊髓炎病毒。
3.有机溶剂沉淀法：甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，但乙醚、氯仿等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯。
4.等电点沉淀法：病毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而发生沉淀。多数病毒的等电点在pH4.5～5.5之间，因此在pH3～6范围内均可沉淀，由于一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀，此法效果不太理想，但从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时，必须注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。
5.皂土法：Girin(1989年)应用皂土在酸性条件下(pH4～4.5)吸附轮状病毒SA-11，再在碱性条件下（pH8.5），又使其洗脱下来，从而达到纯化目的。
6.鱼精蛋白沉淀法：鱼精蛋白为碱性蛋白，具有携带其它蛋白质共沉淀的作用，能和直径大于50nm的病毒共同沉淀而不影响病毒的感染力。当向这种沉淀物加入1mol/LNaCl时，病毒又重新释放到悬液中，而鱼精蛋白仍然沉淀。直径小于50nm的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于50nm的异种蛋白质。
聚乙二醇HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH(n＞4)( Polyethylene Glycol 简写为 PEG)，它的亲水性强，溶于水和许多有机溶剂，对热稳定，有广泛围的分子量，在生物大分子制备中，用的较多的是分子量为6000～20000的 PEG。
PEG 的沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关，同时还受离子强度、溶液pH 和温度等因素的影响。在一定的pH 值下，盐浓度越高，所需PEG 的浓度越低，溶液的pH 越接近目的物的等电点，沉淀所需PEG 的浓度越低。在一定范围内，高分子量和高浓度的PEG 沉淀的效率高。以上这些现象的理论解释还都仅仅是假设，未得到充分的证实，其解释主要有：①认为沉淀作用是聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。②由于聚合物有较强的亲水性，使生物大分子脱水而发生沉淀。③聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，在重力作用下形成沉淀析出。④通过空间位置排斥，使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而发生沉淀。
有机聚合物沉淀的优点是：①操作条件温和，不易引起生物大分子变性；②沉淀效能高，使用很少量的PEG 即可以沉淀相当多的生物大分子；③沉淀后有机聚合物容易去除。
水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇（PEG）及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制尚不清楚，大致有如下解释：①聚合物与蛋白质形成共沉物；①聚合物与蛋白质之间发生水的重分配；①聚合物与蛋白质形成复合物。此法受许多因素影响，主要是pH、离子强度、蛋白质浓度和PEG的分子量等。分子量为 2000～6000的PEG皆适宜于做蛋白沉淀用。如若使用得当，效果甚为满意。一般认为，PEG浓度在3％～4％时沉淀免疫复合物，6％～7％可沉淀IgM，8％～12％可沉淀IgG，12％～15％可沉淀其他球蛋白，25％可沉淀白蛋白。最突出的应用是用3％～4％的PEG沉淀免疫复合物，未结合的抗原和抗体留在溶液中。按此原理设计了快速测定法和循环免疫复合物测定法
从网上搜索到得关于PEG沉淀提纯病毒的方法，先汇总至此贴，希望大家支持本版 1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；
2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000
就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。)；
3、4℃过夜或放置一段时间；
4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4℃过夜； 6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。 还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。
PEG沉淀法提纯病毒
1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；
2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。)；
3、4℃过夜或放置一段时间；
4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4℃过夜； 6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。 还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。
Concentrating virus (PEG6000)
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1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.
2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v).
3. Stir at 4 0Cfor 2 hours.
4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.
5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).
PEG-it?慢病毒浓缩试剂 ? 价 格： ￥3802.5 ? 说 明： 欢迎询价详谈 ? 货 号：LV810A-1
PEG-it?慢病毒浓缩试剂
原理
PEG是高分子聚合物，具有高亲水性，在溶液中会吸收大量水分，减少病毒之间的距离，使病毒与病毒能够很容易的聚合在一起，病毒的相对浓度提高，达到沉淀浓缩的目的。
PEG-it?中还含有特定的（SBI专属的）缓冲液，它能够保持病毒的活性。少量残留的PEG-it?还会提高感染效率，使病毒更稳定。 图1 使用简便快捷
只需将5倍的PEG-it?溶液与包含病毒颗粒的细胞培养基混合离心30分钟，即可得到10-100倍的病毒浓缩液 特点
?快捷：全程只需30min
高效：?能使病毒颗粒浓缩10-100倍
安全：?对所有靶细胞，包括胚胎干细胞是无毒的
?使用方便：无需使用特别的仪器，避免了昂贵的超高速离心机的使用，?只需普通离心机，低速离心即可
无残留：?没有细胞残片的残留，避免对细胞的毒性和免疫原性 ?提高转导效率：为动物转导提供高滴度的病毒 特别?适合大体积的病毒浓缩，解除了超滤管小量的限制 产品信息 货号 产品名称 包装体积 价格（￥） 说明 LV810A-1 PEG-it? Virus Precipitation 100 mL 3802.5 适用于400ml慢病毒细胞上清液浓Solution (100 mL aliquot) 缩 LV825A-1 PEG-it? Virus Precipitation 250 mL 8287.5 适用于1L慢病毒细胞上清液浓缩 Solution (250 mL aliquot)
纯化病毒用终浓度10%PEG处理后8000g离心，溶解于PBS。这样的方法对吗？ PEG沉淀的原理是什么啊？
是这样的，纯化病毒和噬菌体都可以，原理就是PEG8000是一种高度的网状聚合物，很粘稠，可以把病毒沉淀下来。 Catalog # Product Name+ Size Price Buy Now K904-200 PEG Virus Precipitation Kit 200 preparations $725.00 K904-50 中文名称 供应商 产品报价 PEG Virus Precipitation Kit 50 preparations $245.00 PEG Virus Precipitation Kit PEG病毒沉淀试剂盒(200次) Biovision ￥11600/200次分析 包装出来的重组病毒常常含量很少，因此通常需要浓缩之后才能进行储存或其它应用。另外，在病毒包装过程中，可能会产生有毒的蛋白或生物分子杂质。因此需要一种快速、简单而便宜的方法来浓缩病毒，同时去除杂质。 BioVision的PEG病毒沉淀试剂盒提供了一种简单方便省时的方法来浓缩病毒，无需超速离心。本试剂盒可用于小实验样品处理或者大规模高产出、高生物量病毒制备。本试剂盒可利用细胞培养液或者环境样品浓缩逆转录病毒、杆状病毒、慢病毒、噬菌体等。浓缩倍数可达100倍以上。试剂盒中还有一种优化的重悬溶液可最大化地进行病毒复苏，根据病毒类型和来源，复苏比例在40-100%不等。整个过程都使用无毒试剂，浓缩的病毒可用于感染实验、DNA或RNA纯化等。 1、一种快速简单便宜的方法浓缩病毒去除杂质；2、简单方便省时的方法浓缩病毒，无需超速离心；3、病毒可浓缩100以上；4、整个过程都使用无毒试剂。 请在接收到该Biovision品牌的PEG病毒沉淀试剂盒(200次)产品后，置于-20℃保存。 产品货号 K904-200 背景资料 产品描述 产品特点 保存建议
中文名称
PEG Virus Precipitation Kit PEG病毒沉淀试剂盒(50次)