内容发布更新时间 : 2024/5/22 10:24:37星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

生物化学实验常用缓冲液的配制方法

1、0.2mol/L 磷酸缓冲液 *组份浓度0.2mol/L （pH 6.0）*配制量1L *配置方法 1. 称取磷酸氢二钠.12水8.82 g。 2. 称取磷酸二氢钠.2水27.34g。

3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。

注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。

2、洗脱液*组份浓度0.15mol/L （含0.15mol/L 氯化钠的0.005mol/L pH 6.0的磷酸缓冲液）*配制量10L *配置方法 1.称取氯化钠87.66g。

2.用0.2mol/L pH6.0的磷酸缓冲液250mL溶解。

3.用去离子水稀释至10L。室温保存。

3、0.3mol/L 磷酸缓冲液*组份浓度0.3mol/L （pH7.8）*配制量0.5L *配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠.12水49.150g。 2.磷酸二氢钠.2水2.000g。

3.用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。

注意：此为母液，使用时稀释10 倍使用。

4、0.2mol/L 乙酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L （pH4.6）*配制量2L *配置方法 1.准确称取乙酸钠.3水54.44g。

2.加入23mL冰乙酸，溶解。 3.用去离子水溶解并定容至2L。 4℃保存。

5、0.2mol/L 磷酸-柠檬酸缓冲液（pH 2.6、4.6、6.6）*组份浓度0.2mol/L *配制量各1L

*配置方法 1.母液A（0.2mol/L 的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4.12 水143.256g，用去离子水定容至2L。 2.母液B（0.1mol/L 的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸.1水42.028g

用去离子水溶解定容至2L。

3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制： pH值A（mL）B（mL） 2.6 109.0 891.0 4.6 467.5 532.5 6.6 727.5 272.5 4.按上表混匀后，4℃保存。

6、20×SSC 缓冲液*配制量1L（pH7.0） *配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。

2.准确称取88.2g柠檬酸钠.2水。

3.溶解于800mL去离子水中。

4.加入数滴10mol/L 氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。

5.加去离子水定容至1L。

注意：按实验需要可分装后高压灭菌。

10×SSC、5×SSC、1×SSC 可由20×SSC做相应稀释得到。

7、0.15mol/L 氯化钠-乙二胺四乙酸二钠缓冲液（pH8.0）*组份浓度0.15mol/L *配制量1L

*配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。

2.称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。

3.溶于800mL去离子水中。

4.用固体的氢氧化钠调pH 值为8.0。 5.加去离子水定容至1L。

8、1/15mol/L 的磷酸盐缓冲液（pH7.6）*组份浓度0.15mol/L *配制量1L *配置方法 1.溶液甲（1/15mol/L 的KH2PO4溶液）：称取KH2PO49.078g，

用去离子水溶解定容至1L。

2.溶液乙(1/15mol/L 的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4. 2水11.876g（或磷酸氢二钠.12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。

3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。

9、5×TrisGlycineBuffer （SDSPAGE电泳缓冲液）*组份浓度0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS *配制量1L

*配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tris 15.1g

Glycine 94g

SDS 5.0g

2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

10、5×SDSPAGE Loading Buffer *组份浓度250mM TrisHCl（pH6.8）

10％（W/V）SDS 0.5％（W/V）BPB 50％（V/V）甘油

5％（W/V）β巯基乙醇

*配制量5mL

*配置方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。

1M TrisHCl1.25mL SDS 0.5g BPB 25mg

甘油2.5mL

2.加入去离子水溶解后定容至5mL。

3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。

5.加入2M-E的 LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右

1、1M TrisHCl * 组份浓度1M TrisHCl （pH7.4，7.6，8.0） * 配制量1L

* 配置方法 1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH 值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL

8.0 约42mL

4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度

的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH

值大约降低0.03个单位。

2、1.5M TrisHCl *组份浓度1.5M TrisHCl （pH8.8）*配制量1L

*配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3.用浓盐酸调pH 值至8.8。 4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH

值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer *组份浓度100 mM TrisHCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）*配制量1L

*配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1M TrisHClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

500 mM EDTA（pH8.0）20mL

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4.室温保存。

4、3 M 醋酸钠*组份浓度3M 醋酸钠（pH5.2）*配制量100mL

*配置方法 1.称取40.8gNaOAc.3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。 4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer *组份浓度137mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 *配制量1L

*配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。