内容发布更新时间 : 2024/5/21 3:29:50星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
实验 淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆及其葡萄糖值的测定
一、实验目的
1.通过实验，了解淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆的基本原理。 2.掌握淀粉双酶法制备淀粉糖浆的实验方法，以及酶的使用。 3.熟悉淀粉水解产品的葡萄糖值测定方法。
二、实验原理
淀粉是由几百至几千个葡萄糖链节构成的天然高分子化合物，一般含直链淀粉20~30%，支链淀粉70~80%。可用酶法、酸法和酸酶法使淀粉水解成糊精、低聚糖和葡萄糖。淀粉糖浆或称液体葡萄糖（DE38-42），主要成分是葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖和糊精，是一种粘稠液体，甜味温和，极易为人体直接吸收，在饼干，糖果生产上广为应用。
将淀粉悬浮液加热到55-80℃时，会使淀粉颗粒之间的氢键作用力减弱，并迅速进行不可逆溶胀，淀粉粒因吸水，体积膨胀数十倍，继续加热使淀粉胶束全部崩溃，淀粉分子形成单分子，并为水包围，形成具有粘性的糊状液体，这一现象称淀粉糊化。糊化淀粉容易被酶水解。
双酶法水解淀粉制淀粉糖浆，是先以α-淀粉酶使淀粉中的α-1，4甙键水解生成小分子糊精、低聚糖和少量葡萄糖，然后再用糖化酶将糊精、低聚糖中的α-1，6甙键和α-1，4甙键切断，最后生成葡萄糖。
淀粉糖浆的分析方法是根据国家标准GB12099-89，采用莱恩——艾农滴定法测定淀粉水解产品的还原力（RP）和葡萄糖值（DE），例如DE值为42，表示淀粉糖浆中含42%的葡萄糖。
三、实验材料、试剂与仪器
玉米淀粉，木薯淀粉，甘薯淀粉。
液化型α-淀粉酶（酶活力6000单位/g），糖化酶（酶活力为4-5万单位/g），费林溶液A、B，亚甲基兰指示剂，D-葡萄糖标准溶液，10%NaOH, 5%Na2CO3, 5êCl2。
400mL烧杯，250mL圆底烧瓶，容量瓶（100mL, 500mL, 100），移液管（1mL, 5mL, 25mL）， 25mL酸滴定管，250mL碘量瓶，秒表，搅拌器，恒温水浴锅。
四、实验步骤
1.淀粉糖浆的制备
100g淀粉置于400mL烧杯中，加水200mL，搅拌均匀，配成淀粉浆，用5%碳酸钠调节pH≈6.2-6.3，加入2mL 5êCl2溶液，于90-95℃水浴上加热，并不断搅拌，淀粉浆由开始糊化直到完全成糊。加入液化型α-淀粉酶60mg,不断搅拌使其液化。并使温度保持在70-80℃搅拌20分钟，（取样分析DE值）。然后将烧杯移至电炉（隔石棉网）加热到95℃至沸，灭活10分钟。过滤，滤液冷却至55℃，加入糖化酶200mg，调节pH≈4.5, 于60-65℃恒温水浴中糖化3-4小时，（3小时取样分析控制DE≈42）即为淀粉糖浆。若要得浓浆，可以进一步浓缩。 2.DE值的测定
⑴费林试剂和葡萄糖标准溶液配制方法
费林试剂甲液：称取无水硫酸铜15g及亚甲基蓝0.05g用水溶解并定容至1000mL，存于棕色玻璃瓶中。
费林试剂乙液：称取酒石酸钾钠50g及氢氧化钠75g，用水溶解，再加入亚铁氰化钾4g，完全溶解后用水定容至1000mL，存放于橡胶玻璃瓶中。 葡萄糖标准溶液（1g/L）：称取于105℃下烘干至恒重的无水葡萄糖1.0000g,用水溶解后加入5mL浓盐酸，再用水定容至1000mL。
⑵试样的制备：称取淀粉水解液m克，加水，定容至1000mL。
⑶费林氏溶液的标定
吸取费林氏甲、乙液各5mL，置于250mL三角烧瓶中，加水20mL，可加入2粒玻璃珠，从滴定管中滴加约9mL的葡萄糖标准溶液（1g/L），将三角烧瓶置于电炉上加热使其在2分钟内达到沸腾，趁沸腾时以每两秒一滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液（1g/L），直至溶液蓝色刚好褪去即为终点，记下消耗葡萄糖标准溶液（1g/L）的总体积。重复上述实验，两次消耗葡萄糖标准溶液（1g/L）的体积的算术平均值为V3。
⑷预备实验
吸取费林氏甲、乙液各5mL, 置于250mL三角烧瓶中，加水20mL，可加入2粒玻璃珠，将三角烧瓶置于电炉上加热使其在2分钟内达到沸腾,趁沸腾时以先快后慢的速度从滴定管中，滴加试样液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒一滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，消耗试样体积为V1 。
⑸正式试验
吸取费林氏甲、乙液各5mL，置于250mL三角烧瓶中，加水20mL，可加入2粒玻璃珠，从滴定管中滴加约(V3-1)mL的试样于三角烧瓶中，将三角烧瓶置于电炉上加热使其在2分钟内达到沸腾，趁沸腾时以每两秒一滴的速度继续滴加试样溶液，直至溶液蓝色刚好褪去即为终点，记下消耗试样溶液的总体积。重复上述实验，两次消耗试样溶液的体积的算术平均值为V4。平行实验之差小于0.1mL。 结果表示至一位小数。
五、数据处理与计算
DE=（1×V3×10）/（V4×m×G）
式中：DE—样品的DE值，%；
V3—标定时消耗葡萄糖标准液（1g/L）的体积，mL； V4—测定时消耗试样的体积，mL； m—样品的质量，g； G—样品的固形物含量。
六、思考题
1.为什么在测定DE值的整个滴定过程中，要保持沸腾，蒸汽始终充满烧瓶？
2.当D-葡萄糖标准溶液的体积耗用数不在19-21mL这一范围内时，应采取哪些措施加以调整？